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豬媽媽關(guān)愛行動——“瀉芷優(yōu)”抑制母豬排毒的腹瀉疫苗
發(fā)布時間：
2018-10-09 00:00
作者：
技術(shù)服務(wù)部
瀉芷優(yōu)——抑制母豬排毒的腹瀉疫苗
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先進(jìn)培養(yǎng)技術(shù)，抗原效價高，免疫原性更好。
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分級微濾與超濾的純化技術(shù)，抗原純度高，安全性好。
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優(yōu)選優(yōu)化腹瀉疫苗株的應(yīng)用，保護(hù)范圍更廣。
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進(jìn)口鋁膠佐劑，顆粒細(xì)小而均勻，抗原吸附更好。
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瀉芷優(yōu)母豬產(chǎn)前兩次免疫，產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體，抑制母豬排毒。
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瀉芷優(yōu)母豬產(chǎn)前兩次免疫，免疫后母豬乳汁中含有高水平的SIgA，哺乳仔豬在攝取母豬初乳時獲得SIgA而獲得對PEDV的抵抗力。
豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的以仔豬嘔吐、腹瀉、脫水、死亡為主要特征的一種急性、高度接觸性、病毒性腸道傳染病。我國于1983 年首次發(fā)現(xiàn)該病，隨后開始在我國呈散發(fā)性、區(qū)域性流行。但自2010 年末開始，我國豬場陸續(xù)暴發(fā)了由PEDV引起的以新生仔豬嚴(yán)重嘔吐、水樣腹瀉、腸道出血和高病死率為主要特征的“頑固性腹瀉”疫情，引起了業(yè)界的廣泛關(guān)注?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為PED是未來危害仔豬健康最為嚴(yán)重的疾病之一。
豬傳染性胃腸炎（TGE）是由豬傳染性胃腸炎病毒引起豬的一種高度接觸性消化道傳染病。以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征。OIE將其列為B類動物疫病。
一
PED流行病學(xué)監(jiān)測情況
隨著PED日益流行，以及我國對PEDV 感染的逐步重視，我國研究學(xué)者對不同地區(qū)的PEDV 感染情況進(jìn)行了大量的流行病學(xué)監(jiān)測。自2010 年以來，我國豬場PEDV 陽性感染率一直居高不下，區(qū)域性流行特點(diǎn)顯著，如2012—2013 年四川的感染率高達(dá)86.67%，2014—2015 年山西的感染率達(dá)73.26%，2016—2017 年黑龍江、吉林、遼寧、河北等4省的感染率達(dá)74.62%。PEDV在我國豬群中已廣泛流行，且在個別地區(qū)感染率較高，感染情況比較嚴(yán)峻，應(yīng)加強(qiáng)重視。
二
PED近幾年發(fā)病特征
1、易感豬的日齡范圍擴(kuò)大：2日齡-20周豬均發(fā)?。òú溉槟肛i）,7日齡內(nèi)仔豬的死亡率可高達(dá)100%。
2、臨床表現(xiàn)：嘔吐，水樣腹瀉，其他癥狀不明顯。
3、復(fù)發(fā)：間隔二十天后再次發(fā)生，有的豬場反復(fù)4次以上。
4、持續(xù)時間長：可長達(dá)數(shù)月，最長可達(dá)半年。
5、溫度很高的季節(jié)依然發(fā)生，7~8 月份依然有疫情發(fā)生。
6、母豬也會有輕微的腹瀉癥狀和食欲減退。
7、對母豬生產(chǎn)性能造成很大影響（不發(fā)情或返情率增加），經(jīng)產(chǎn)母豬非正常淘汰率增加。
8、給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
三
分析與討論
目前，我國豬群感染豬流行性腹瀉相當(dāng)普遍，截至2018年1月中旬，我國腹瀉疫情屢屢發(fā)生，豬流行性腹瀉給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。面對近年來的腹瀉疫情，在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中一些經(jīng)典的腹瀉疫苗不能很好地抵抗疾病，因此，飼養(yǎng)者們通過選擇合適的疫苗進(jìn)行科學(xué)的免疫防疫才是科學(xué)有效的防控手段。
當(dāng)懷孕母豬產(chǎn)生免疫并通過母源抗體，保護(hù)其后代，可停止發(fā)生（10版豬病學(xué)）。
多年來，中岸生物對PED疫苗的研發(fā)工作一直沒有停滯。篩選和培育出具有良好免疫原性、高抗原效價的毒株是疫苗研制成功的關(guān)鍵。動物機(jī)體抗感染免疫的過程中，體液免疫和細(xì)胞免疫都非常重要。目前，基于腹瀉疫情發(fā)生形勢的變化，結(jié)合現(xiàn)有腹瀉疫苗研究概況，我們認(rèn)為今后對豬流行性腹瀉疫苗的研發(fā)可以從以下方面加以重視：
1、豬流行性腹瀉近幾年有新變化，研究人員可以長期監(jiān)測腹瀉疫情的發(fā)生，加快科技轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力的進(jìn)度，加快實(shí)驗(yàn)室研發(fā)轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)的速度，使養(yǎng)豬業(yè)受惠。
2、有針對性地考慮加強(qiáng)聯(lián)苗的研發(fā)。持續(xù)追蹤調(diào)查，檢測和分離臨床上與PEDV 共感染的其他腸病毒，作為多聯(lián)疫苗毒株的候選。
四
防控PED為什么用滅活疫苗
通過疫苗防控病毒性腹瀉，已經(jīng)是公認(rèn)的最好的防御措施，但活疫苗和滅活疫苗的免疫效果如何，疫苗如何組合免疫效果更好，韓國研究人員做了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。本研究使用的活疫苗和滅活疫苗均來自韓國，20頭配種母豬隨機(jī)分成4組，每組5頭。4組分別為非免疫陰性組、滅活苗免疫組和滅活疫苗加強(qiáng)組（K/K）、活疫苗免疫組和活疫苗加強(qiáng)組（L/L）、活疫苗免疫組和滅活疫苗加強(qiáng)組（L/K）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)疫苗免疫指導(dǎo)方針進(jìn)行免疫PEDV疫苗。母豬免疫兩次，分娩前4周和前2周各免疫一次。疫苗進(jìn)行肌肉注射免疫。血清和初乳的ELISA檢測、血清中和試驗(yàn)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。結(jié)果表明，母豬血清樣品中，K/K組有較高的IgG抗體滴度，比L/L組或L/K組高2倍, 母豬血清中的IgG可以保護(hù)母豬不受PEDV感染；初乳樣品中，K/K組的SIgA水平最高，母乳中的SIgA抗體滴度高，為哺乳仔豬對抗PEDV提供了保護(hù)力；三組仔豬血清的SIgA滴度，K/K組的SIgA水平最高（下圖）。
血清中和滴度。L/L、L/K或K/K免疫的母豬血清、初乳和仔豬血清進(jìn)行中和試驗(yàn)評估抗體的潛在保護(hù)力。
血清中和抗體是疫苗效力最重要的因素。K/K免疫組母豬和仔豬具最有效的中和抗體，尤其體現(xiàn)在初乳中。這個發(fā)現(xiàn)非常重要，因?yàn)殛P(guān)乎到PEDV疫苗接種策略，PEDV主要依靠被動免疫獲得有效的保護(hù)性抗體，哺乳仔豬在攝取母豬初乳時獲得SIgA而獲得對PEDV的抵抗力。母豬血清中的IgG可以保護(hù)母豬不受PEDV感染，另外，據(jù)報道，美國的一項(xiàng)研究表明，給產(chǎn)前母豬免疫滅活疫苗可以激起母豬對PEDV的免疫回憶應(yīng)答，激發(fā)母豬腸道粘膜分泌SIgA（隨后激發(fā)腸道乳腺鏈接，從而誘導(dǎo)催乳免疫，乳腺分泌SIgA），腸道粘膜SIgA可聚集潛在和入侵的PEDV，使之易于通過蠕動纖毛運(yùn)動和粘液將其清除，以保護(hù)腸道屏障的完整，讓母豬減少PEDV排毒或不排毒，從而減少對仔豬PEDV的垂直傳播。
盡管，PED疫苗的效力普遍還存在爭議，目前的研究表明，給產(chǎn)前母豬免疫和加強(qiáng)免疫滅活疫苗能夠刺激母豬產(chǎn)生較高水平的IgG和SIgA抗體滴度。K/K組能為母豬和仔豬提供最有效的中和抗體。“瀉芷優(yōu)”比目前市場競品的抗原含量高10-100倍，母豬產(chǎn)前免疫“瀉芷優(yōu)+瀉芷優(yōu)”程序是豬場預(yù)防PED的最好選擇。
五
為什么采用后海穴注射
豬后海穴位于畜禽尾根與肛門間凹陷處。大量試驗(yàn)結(jié)果表明后海穴注射同時發(fā)揮了經(jīng)絡(luò)腧穴的傳導(dǎo)治療作用和傳統(tǒng)給藥途徑的藥理治療作用，使疫苗作用的速度和強(qiáng)度超過同等劑量下的肌肉注射。 而且已經(jīng)有不少試驗(yàn)結(jié)果表明后海穴對疫苗的放大作用與免疫功能密切相關(guān)。通過豬后海穴注射與常規(guī)口服、肌肉注射3種途徑免疫豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)疫苗，結(jié)果表明母豬初乳、常乳及免疫仔豬血清中IL-2的含量以穴位免疫最高。IL-2是一種白介素，是免疫系統(tǒng)中的一類細(xì)胞生長因子，能調(diào)控免疫系統(tǒng)中白血球的細(xì)胞活性，也參與抗體反應(yīng)。
1、IL-2可刺激T細(xì)胞產(chǎn)生多種淋巴因子。
2、IL-2直接作用于B細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、分化和IgG分泌。
3、IL-2可活化巨噬細(xì)胞。
4、IL-2對某些因細(xì)胞免疫功能低下而受病毒感染，需增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的動物有一定療效。
5、IL-2可通過增強(qiáng)CTL(一種特異T細(xì)胞)活性，分泌各種細(xì)胞因子參與免疫作用，對病毒、腫瘤細(xì)胞等抗原物質(zhì)具有殺傷作用，與自然殺傷細(xì)胞構(gòu)成機(jī)體抗病毒免疫的重要防線。
6、IL-2可同時增強(qiáng)NK(自然殺傷細(xì)胞，是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，與抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān))活性以及誘導(dǎo)干擾素產(chǎn)生而介導(dǎo)抗病毒感染的。
7、IL-2可提高機(jī)體保護(hù)性免疫應(yīng)答的水平。
六
瀉芷優(yōu)產(chǎn)品優(yōu)勢及技術(shù)特點(diǎn)
圖一：被動免疫與競品的比較（PED）；圖二：主動免疫與競品的比較（PED）
圖三：被動免疫與競品的比較（TGE）；圖四：主動免疫與競品的比較（TGE）
七
產(chǎn)品質(zhì)量
通過分級微濾與分級超濾的純化工藝，大大減少了半成品毒液中的大分子與小分子雜蛋白的干擾，疫苗安全性更好，免疫效果更佳。
用實(shí)時熒光定量PCR進(jìn)行病毒拷貝數(shù)的測定，與競品比差異顯著，一般疫苗是28-10，瀉芷優(yōu)可以達(dá)到212。
瀉芷優(yōu)常規(guī)免疫二免后14天腹瀉中和抗體不低于1:32，28天腹瀉中和抗體不低于1:64，胃腸炎中和抗體不低于1:32。
腹瀉二聯(lián)苗的效力檢驗(yàn)-qPCR
相同抗原效價的條件下，瀉芷優(yōu)所含的病毒拷貝數(shù)更多，有效抗原含量更高。瀉芷優(yōu)腹瀉病毒拷貝數(shù)為1010/ml，比市場競品（市場競品病毒拷貝數(shù)為108-109/ml）高10-100倍。
與疫苗安全性相關(guān)的重要指標(biāo)
八
產(chǎn)品的研發(fā)與核心技術(shù)
分級微濾與超濾純化技術(shù)
1、先進(jìn)培養(yǎng)技術(shù)，抗原效價高，免疫原性更好。
2、分級微濾與超濾的純化技術(shù)，抗原純度高，副反應(yīng)更小。
3、優(yōu)選優(yōu)化腹瀉疫苗株的應(yīng)用，保護(hù)范圍更廣。
4、進(jìn)口鋁膠佐劑，顆粒細(xì)小而均勻，抗原吸附更好。
進(jìn)口納米鋁膠佐劑的優(yōu)勢
新型進(jìn)口納米鋁膠佐劑，顆粒細(xì)小而均勻，抗原吸附率明顯高于國產(chǎn)鋁膠佐劑。
九
建議免疫程序
用優(yōu)選優(yōu)化的PEDV疫苗株制備的滅活疫苗（瀉芷優(yōu)）有比較理想的保護(hù)力，推薦免疫程序：
1、后備母豬：
配種前后海穴注射免疫三次瀉芷優(yōu)，每次2毫升/頭豬；
2、經(jīng)產(chǎn)母豬：
產(chǎn)前6周、4周各后海穴注射一次瀉芷優(yōu)，每次2毫升/頭豬。
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